GRSF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405858

Übersicht

GRSF1 kodiert GRSF-1, ein RNA-bindendes Protein, das in Mitochondrien angereichert ist, G-reiche RNA-Elemente erkennt und die posttranskriptionelle Kontrolle der mitochondrialen Genexpression unterstützt. Es ist an der Verarbeitung, Stabilität und Translation mitochondrialer RNA beteiligt und beeinflusst dadurch die oxidative Phosphorylierung, die Funktion der mitochondrialen Ribosomen und die zelluläre Bioenergetik. Über diese Funktionen verknüpft GRSF-1 den RNA-Stoffwechsel mit Stressantworten und der Aufrechterhaltung der mitochondrialen Homöostase. Veränderte GRSF1-Aktivität wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen mitochondriale Dysfunktion eine Rolle spielt, darunter Neurodegeneration und krebsassoziiertes metabolisches Remodeling, bei dem Programme der mitochondrialen Genexpression häufig gestört sind.

Das GRSF-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRSF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRSF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRSF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GRSF-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRSF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GRSF-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRSF1-Exone abzielen, die für die GRSF-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRSF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GRSF-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GRSF-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRSF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GRSF-1 HDR-Plasmid (h) und GRSF-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRSF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRSF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.