Particules Lentivirales d'Activation (h) GRP 75: sc-400471-LAC

HSPA9 code pour GRP75 (mortalin), une chaperonne HSP70 associée aux mitochondries, qui soutient l’import, le repliement et la protéostasie des protéines au sein de la matrice mitochondriale et aux sites de contact mitochondries–RE. GRP75 contribue à la biogenèse mitochondriale et au contrôle qualité, intègre les réponses au stress au métabolisme énergétique, et module l’apoptose ainsi que la sénescence via des interactions avec des voies telles que la signalisation p53 et les réseaux de stress oxydant. Une altération de la fonction HSPA9/GRP75 a été associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale et fait l’objet d’études dans des contextes incluant la neurodégénérescence, des syndromes d’insuffisance hématopoïétique et le métabolisme des cellules cancéreuses. En tant que régulateur central de la résilience cellulaire au stress, GRP75 est fréquemment étudiée pour ses rôles dans la dynamique mitochondriale, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et la signalisation des membranes associées aux mitochondries.

Les particules d'activation lentivirales GRP 75 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HSPA9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GRP 75 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HSPA9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GRP 75. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HSPA9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.