Plasmide CRISPR/Cas9 KO group IID sPLA₂ (m): sc-422283

Présentation

Pla2g2d code la phospholipase A2 sécrétée du groupe IID (sPLA2), une enzyme extracellulaire qui hydrolyse les phospholipides membranaires afin de libérer des acides gras libres et des lysophospholipides, façonnant ainsi des réservoirs de médiateurs lipidiques qui alimentent les voies de signalisation des eicosanoïdes et apparentées. Dans les tissus de souris riches en activité immunitaire, la sPLA2 du groupe IID contribue à la régulation du tonus inflammatoire en modulant la fonction des cellules présentatrices d’antigène, les programmes de cytokines et les réseaux lipidiques associés à la résolution. Par ses effets sur la disponibilité de l’acide arachidonique et sur la biosynthèse en aval des prostaglandines et des leucotriènes, Pla2g2d relie le remodelage des phospholipides au dialogue entre immunité innée et adaptative. Une expression ou une activité dérégulée a été associée, dans des modèles précliniques, à une susceptibilité modifiée aux pathologies inflammatoires et au remodelage tissulaire induit par l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO group IID sPLA2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pla2g2d dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pla2g2d, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pla2g2d à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine group IID sPLA2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pla2g2d pour l'étude de la signalisation de group IID sPLA2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pla2g2d essentiels à la fonction de group IID sPLA2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pla2g2d pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le group IID sPLA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le group IID sPLA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pla2g2d. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le group IID sPLA2 plasmide HDR (m) et le group IID sPLA2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pla2g2d pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pla2g2d définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.