group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422283
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- group IID sPLA2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im group IID sPLA2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422283 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Pla2g2d kodiert die sekretierte Phospholipase A2 der Gruppe IID (sPLA2), ein extrazelluläres Enzym, das Membranphospholipide hydrolysiert und dabei freie Fettsäuren sowie Lysophospholipide freisetzt. Dadurch formt es Pools von Lipidmediatoren, die in Eicosanoid- und verwandte Signalwege einspeisen. In Mausgeweben mit hoher Immunaktivität trägt die sPLA2 der Gruppe IID zur Regulation des Entzündungsniveaus bei, indem sie die Funktion antigenpräsentierender Zellen, Zytokinprogramme und auf die Auflösung ausgerichtete Lipidnetzwerke moduliert. Über Effekte auf die Verfügbarkeit von Arachidonsäure und die nachgeschaltete Prostaglandin-/Leukotrien-Biosynthese verknüpft Pla2g2d das Phospholipid-Remodeling mit dem Zusammenspiel von angeborener und adaptiver Immunität. Eine dysregulierte Expression oder Aktivität wurde in präklinischen Modellen mit einer veränderten Anfälligkeit für entzündliche Pathologien und immunvermitteltes Gewebe-Remodeling in Verbindung gebracht.
Das group IID sPLA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pla2g2d-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pla2g2d-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pla2g2d nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die group IID sPLA2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pla2g2d-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der group IID sPLA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Pla2g2d-Exone abzielen, die für die group IID sPLA2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pla2g2d-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom group IID sPLA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom group IID sPLA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pla2g2d-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das group IID sPLA2 HDR-Plasmid (m) und group IID sPLA2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pla2g2d-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pla2g2d-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.