Plasmide Double Nickase (h) GRIP-1: sc-401800-NIC

NCOA2 code pour GRIP-1 (coactivateur des récepteurs nucléaires 2), un corégulateur transcriptionnel qui relie les récepteurs nucléaires liés à leur ligand aux complexes de remodelage de la chromatine et à la machinerie de l’ARN polymérase II afin de moduler les programmes d’expression génique. GRIP-1 interagit avec les récepteurs aux hormones stéroïdiennes et d’autres facteurs de transcription pour influencer les décisions de destinée cellulaire, l’homéostasie métabolique et la signalisation du développement, via l’assemblage de complexes coactivateurs et une transcription dépendante de l’acétylation des histones. En tant que régulateur nodal de la transcription sensible aux hormones, NCOA2 est étudié dans des contextes où une modification de l’équilibre des coactivateurs perturbe les programmes de différenciation et de prolifération. La dérégulation ou les réarrangements de NCOA2 ont été impliqués dans des circuits transcriptionnels oncogéniques et des modifications de l’expression génique spécifiques de lignées, ce qui motive des études mécanistiques de la fonction de GRIP-1 dans des modèles pertinents pour les maladies.

GRIP-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NCOA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NCOA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NCOA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NCOA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.