Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) GRASP55: sc-401106-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GRASP55 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GRASP55 (h) y el plásmido de doble nickasa GRASP55 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GORASP2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GRASP55 Anticuerpo (E-5): sc-271840
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GRASP55 | sc-401106-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GRASP55 | sc-401106-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **GORASP2** codifica **GRASP55**, una proteína de apilamiento y reensamblaje del Golgi que ayuda a mantener la organización de las cisternas del Golgi y favorece el anclaje de vesículas y el tráfico de membranas entre el retículo endoplásmico (RE) y el Golgi. GRASP55 participa en la formación de la cinta del Golgi y se ha implicado en la secreción no convencional de proteínas, contribuyendo a la proteostasis y a programas de tráfico adaptativos frente al estrés. La perturbación de la arquitectura del Golgi dependiente de GRASP55 puede alterar la glucosilación, la secreción y la salida de señalización celular, procesos que con frecuencia se remodelan en el cáncer, la neurodegeneración y los estados inflamatorios. Como resultado, **GORASP2** es un locus útil para analizar cómo la estructura del Golgi se integra con la homeostasis de la vía secretora y con fenotipos celulares asociados a enfermedad.
GRASP55 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GORASP2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GORASP2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GORASP2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GORASP2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.