Plasmide CRISPR d'Activation (m) GPSM3: sc-430655-ACT

Le gène murin *Gpsm3* code GPSM3, un régulateur de la signalisation des protéines G hétérotrimériques contenant un motif GoLoco, qui module préférentiellement les sous-unités Gα de la classe Gi/o et influence la propagation des signaux induits par les GPCR. En façonnant l’état d’activation des protéines G et les voies de seconds messagers en aval, GPSM3 contribue aux réponses chimiotactiques, à la dynamique du cytosquelette et à une régulation dépendante du contexte de la signalisation inflammatoire au sein des lignées myéloïdes et lymphoïdes. Des études génétiques et fonctionnelles ont associé une activité altérée de GPSM3 à la susceptibilité aux maladies à médiation immune et à des variations des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer le trafic des leucocytes et l’homéostasie immunitaire. Dans des modèles murins, la perturbation de l’expression de *Gpsm3* est utilisée pour préciser comment les seuils de signalisation des GPCR influencent les réponses immunitaires innée et adaptative.

GPSM3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gpsm3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPSM3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gpsm3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gpsm3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPSM3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gpsm3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPSM3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPSM3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gpsm3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.