Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPRC6A: sc-403492-ACT

GPRC6A code un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) de classe C impliqué dans la détection des nutriments et dans le dialogue endocrino‑métabolique. Il répond à des signaux extracellulaires tels que les acides aminés basiques et les cations divalents. En se couplant à des protéines G hétérotrimériques, GPRC6A peut moduler les voies de signalisation des seconds messagers et des kinases en aval, qui influencent le métabolisme cellulaire, la sécrétion hormonale et le tonus inflammatoire. Son activité a été étudiée dans des contextes tels que l’homéostasie du glucose, l’équilibre énergétique et la signalisation ostéoendocrine, reliant une signalisation dépendante du récepteur à la biologie métabolique et squelettique. Dans la littérature, une expression ou une signalisation altérée de GPRC6A a été associée à des phénotypes pathologiques complexes en lien avec l’obésité, le diabète de type 2 et des traits cardiométaboliques, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de voies biologiques.

GPRC6A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPRC6A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPRC6A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPRC6A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPRC6A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPRC6A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPRC6A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPRC6A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPRC6A dans les cellules tumorales présentant une expression de GPRC6A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.