Plasmide Double Nickase (h) GPRC5D: sc-403114-NIC

GPRC5D (récepteur couplé aux protéines G de classe C, groupe 5, membre D) est un RCPG orphelin humain fortement exprimé dans des compartiments épithéliaux différenciés, où il est associé à la régulation de l’état cellulaire, aux réponses au stress et à des programmes de signalisation dépendants du contexte. En tant que protéine de type récepteur membranaire, GPRC5D est bien placé pour moduler des voies en aval qui s’intègrent aux réseaux de signalisation MAPK et à d’autres réseaux associés aux RCPG, influençant les sorties transcriptionnelles et l’adaptation cellulaire. Une expression altérée de GPRC5D a été rapportée dans plusieurs contextes pathologiques, notamment des cancers, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des marqueurs de lignée, la signalisation médiée par les récepteurs et la régulation génique associée aux tumeurs. Ses profils d’expression restreints soutiennent également des travaux sur la spécificité de type cellulaire et la biologie des protéines de surface dans des modèles humains.

GPRC5D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPRC5D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPRC5D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPRC5D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPRC5D.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.