Plasmide Double Nickase (h) GPRC5B: sc-409271-NIC

GPRC5B (membre B du groupe 5 de la famille C des récepteurs couplés aux protéines G) est une protéine de type GPCR orpheline, inductible par l’acide rétinoïque, enrichie à la membrane plasmique et impliquée dans la modulation de la signalisation des récepteurs ainsi que des réseaux d’adaptateurs proximaux à la membrane. Elle a été associée à la régulation de la dynamique des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, influençant la croissance cellulaire, la différenciation et des programmes transcriptionnels répondant au stress. Dans les tissus humains, l’expression de GPRC5B est corrélée à des phénotypes métaboliques et inflammatoires, et une régulation altérée a été rapportée dans des contextes incluant la signalisation de l’insuline associée à l’obésité, la neuroinflammation et la biologie tumorale. En tant que nœud de signalisation, GPRC5B est fréquemment étudiée pour ses effets sur les interactions entre voies, le trafic des récepteurs et les sorties transcriptionnelles en aval.

GPRC5B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPRC5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPRC5B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPRC5B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPRC5B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.