GPR56 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406370-ACT

ADGRG1 codifica o receptor de adesão acoplado à proteína G GPR56 (GPCR56), um receptor de superfície celular com um grande domínio extracelular que medeia interações célula–célula e célula–matriz e regula migração, polaridade e organização tecidual. O GPR56 promove sinalização dependente de adesão por meio de proteínas G heterotriméricas e vias a jusante que influenciam a dinâmica do citoesqueleto e a remodelação da matriz extracelular, com acoplamento relatado à sinalização associada a RhoA em múltiplos contextos celulares. No sistema nervoso, contribui para o desenvolvimento cortical e o posicionamento neuronal, e a expressão desregulada de ADGRG1 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a comportamento invasivo alterado em modelos de câncer. Essas propriedades tornam ADGRG1 um alvo útil para estudar a biologia de GPCRs de adesão, a sinalização ligada à MEC e mecanismos que conectam a regulação de receptores de superfície a programas transcricionais e migratórios.

GPR56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADGRG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADGRG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADGRG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR56. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADGRG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR56 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR56 em células tumorais com expressão de ADGRG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.