Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR43 (h): sc-401858

Présentation

FFAR2 code pour GPR43, un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) capable de détecter les acides gras à chaîne courte (AGCC), activé par l’acétate, le propionate et le butyrate produits par le microbiote intestinal. GPR43 se couple principalement aux voies Gαi/o et Gαq afin de moduler la signalisation de l’AMPc, les flux de calcium intracellulaire et les réponses MAPK/ERK en aval, orientant la chimiotaxie, la production de cytokines et la régulation immunitaire associée à la barrière. Il est fortement exprimé dans des cellules immunitaires telles que les neutrophiles et les macrophages, ainsi que dans des tissus métaboliques, reliant les métabolites microbiens aux programmes d’homéostasie inflammatoire et énergétique. Une signalisation FFAR2/GPR43 dérégulée a été associée à des troubles inflammatoires et à des phénotypes métaboliques, ce qui étaye des études mécanistiques des interactions hôte–microbiome dans des contextes pathologiques pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR43 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FFAR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FFAR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FFAR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR43.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FFAR2 pour l'étude de la signalisation de GPR43, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FFAR2 essentiels à la fonction de GPR43
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FFAR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR43 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR43 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FFAR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR43 plasmide HDR (h) et le GPR43 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FFAR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FFAR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.