Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR43: sc-401858-ACT

FFAR2 codifica el receptor de ácidos grasos de cadena corta GPR43, un GPCR que detecta acetato, propionato y butirato derivados del metabolismo microbiano intestinal. Tras su activación, GPR43 se acopla principalmente a las vías de señalización Gi/o y Gq para modular el AMPc, los flujos de calcio intracelular y las vías MAPK aguas abajo, influyendo en la quimiotaxis de leucocitos, la producción de citocinas y las respuestas de la barrera epitelial. Este receptor participa en el diálogo inmunometabólico en superficies mucosas y en el tejido adiposo, vinculando la disponibilidad de nutrientes con el tono inflamatorio. La señalización alterada de FFAR2/GPR43 se ha asociado con trastornos inflamatorios y desregulación metabólica, lo que lo hace relevante para estudiar las interacciones huésped–microbioma y las vías de la inmunidad innata.

GPR43 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FFAR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR43 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FFAR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FFAR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR43. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FFAR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR43 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR43 en células tumorales con expresión de FFAR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.