Partículas Lentivirales de Activación (h2) GPR40: sc-401434-LAC-2

El FFAR1 (GPR40) humano codifica un receptor acoplado a proteínas G para ácidos grasos libres de cadena media y larga que se acopla principalmente a Gαq/11 para impulsar la activación de la fosfolipasa C, la movilización de Ca2+ intracelular y la señalización posterior de PKC/MAPK. En las células β pancreáticas y otros tejidos metabólicamente activos, GPR40 actúa como un sensor de nutrientes que vincula la disponibilidad de lípidos con respuestas secretoras reguladas y con un control más amplio de la homeostasis glucosa–lípidos. Las alteraciones en la señalización de FFAR1 se han implicado en la desregulación metabólica, incluidos defectos de secreción de insulina asociados a la obesidad y fenotipos relevantes para la diabetes tipo 2, y también se han explorado en contextos como la inflamación y el metabolismo del cáncer. La edición génica de FFAR1 permite la disección mecanística de la señalización de ácidos grasos mediada por GPCR, el estudio del acoplamiento estímulo–secreción en células β y el mapeo de rutas en modelos celulares mediante ensayos transcriptómicos, fosfoproteómicos y funcionales.

Las partículas de activación lentiviral GPR40 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FFAR1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GPR40 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FFAR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GPR40. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FFAR1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.