GPR35 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416792-ACT

GPR35 codifica um receptor acoplado à proteína G da classe A, enriquecido em tecidos imunes e gastrointestinais, que se acopla a proteínas G heterotriméricas para regular a sinalização intracelular de segundos mensageiros. Entre os ligantes descritos estão pequenas moléculas associadas ao microbioma e ao metabolismo, posicionando o GPR35 como um sensor que liga pistas ambientais a respostas celulares. As vias a jusante comumente envolvem a modulação de cAMP, o fluxo de Ca²⁺ e a sinalização ERK/MAPK, com efeitos sobre quimiotaxia, função de barreira e produção de mediadores inflamatórios. Alterações na expressão ou na sinalização de GPR35 têm sido associadas à suscetibilidade à doença inflamatória intestinal e a fenótipos imunometabólicos mais amplos, sustentando sua relevância em estudos de imunidade e inflamação de mucosas.

GPR35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR35 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR35 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR35, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR35. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR35 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR35 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR35 em células tumorais com expressão de GPR35 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.