GPR19 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407000

Descripción general

GPR19 codifica un receptor huérfano acoplado a proteína G que se localiza predominantemente en la membrana plasmática y se considera que se acopla a proteínas G heterotriméricas para influir en la señalización de segundos mensajeros y en programas transcripcionales posteriores. Aunque su ligando endógeno aún no está completamente definido, la actividad de GPR19 se ha vinculado con la regulación de la excitabilidad celular, la señalización metabólica y el control dependiente del contexto de la proliferación y la diferenciación. Las vías mediadas por GPCR asociadas con GPR19 pueden converger con la señalización de cAMP/PKA, MAPK/ERK y dependiente de calcio, modulando decisiones sobre el estado celular y respuestas al estrés. Los cambios en los paisajes de señalización de GPCR, incluida la expresión desregulada de receptores huérfanos como GPR19, se investigan en afecciones multifactoriales que abarcan la neurobiología, la inflamación y fenotipos relacionados con el cáncer, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR19 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GPR19 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GPR19 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GPR19 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR19.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GPR19 para la investigación de la señalización de GPR19, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GPR19 críticos para la función de GPR19
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GPR19 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPR19 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPR19 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GPR19. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR19 (h) y el plásmido HDR GPR19 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GPR19 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GPR19 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.