GPR172A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405622

Descripción general

SLC52A2 codifica la proteína transportadora humana de riboflavina GPR172A (RFVT2), un transportador de membrana plasmática que media la captación celular de riboflavina (vitamina B2), precursora de los cofactores flavínicos esenciales FMN y FAD. Al sostener reacciones redox dependientes de flavoproteínas, el metabolismo oxidativo mitocondrial y la defensa antioxidante, GPR172A respalda vías que incluyen el transporte de electrones, la oxidación de ácidos grasos y, de forma más general, la homeostasis energética celular. La alteración del transporte de riboflavina perturba las actividades de enzimas dependientes de flavinas y se ha vinculado con disfunción neurometabólica. La variación genética en SLC52A2 se asocia con síndromes de deficiencia del transportador de riboflavina que afectan a los nervios periféricos y a la función del sistema nervioso central, lo que lo hace relevante para estudios sobre transporte de nutrientes y respuestas al estrés mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR172A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC52A2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC52A2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC52A2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR172A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC52A2 para la investigación de la señalización de GPR172A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC52A2 críticos para la función de GPR172A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC52A2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPR172A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPR172A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC52A2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR172A (h) y el plásmido HDR GPR172A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC52A2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC52A2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.