GPR17 Double Nickase Plasmid (h): sc-402977-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR17 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR17 Double-Nickase-Plasmid (h) und GPR17 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPR17 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GPR17: sc-514723
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR17 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402977-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR17 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402977-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR17 kodiert einen rhodopsinähnlichen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der extrazelluläre purinerge sowie cysteinyl‑Leukotrien‑bezogene Signale integriert, um intrazelluläre Second‑Messenger‑Signalwege zu modulieren, einschließlich cAMP‑ und calciumabhängiger Signalübertragung. Im zentralen Nervensystem ist die GPR17-Expression besonders in Zellen der Oligodendrozytenlinie angereichert und wird damit in Verbindung gebracht, die zeitliche Abstimmung von Differenzierungs- und Myelinisierungsprogrammen zu koordinieren, indem die Rezeptoraktivität mit neuroinflammatorischen Reizen und Gewebeumbau verknüpft wird. Der Rezeptor wurde außerdem im Kontext ischämischer Stressantworten und inflammatorischer Signalgebung untersucht, bei denen veränderte GPCR-Signalwege Aktivierungszustände von Gliazellen und nachgeschaltete transkriptionelle Netzwerke umgestalten können. Dadurch ist GPR17 ein hilfreiches Ziel, um die GPCR‑getriebene Regulation der neuronalen Entwicklung, entzündungsassoziierter Signalwege und Zellschicksalsübergänge zu untersuchen.
GPR17 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPR17-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPR17 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPR17-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPR17-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.