GPR17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402977-ACT

GPR17 codifica um recetor acoplado à proteína G implicado na sinalização purinérgica e de leucotrienos cisteinílicos, integrando estímulos extracelulares de nucleótidos e mediadores lipídicos em vias intracelulares de segundos mensageiros. No sistema nervoso central, o GPR17 está associado à progressão da linhagem de oligodendrócitos e a programas de mielinização, influenciando respostas celulares a sinais associados a lesão e a microambientes inflamatórios. A sua atividade interseta-se com redes reguladas por GPCR que modulam a sinalização por nucleótidos cíclicos, cascatas de MAPK e processos quimiotáticos ou de resposta ao stress, dependendo do contexto celular. A expressão ou sinalização desregulada de GPR17 tem sido investigada em condições neuroinflamatórias e desmielinizantes, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos da biologia glial e da sinalização associada a dano.

GPR17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR17 em células tumorais com expressão de GPR17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.