Plasmide Double Nickase (h) GPI: sc-402796-NIC

L’isomérase du glucose-6-phosphate (GPI) est une enzyme cytosolique qui catalyse l’interconversion réversible du glucose-6-phosphate et du fructose-6-phosphate, reliant la glycolyse et la gluconéogenèse et influençant l’équilibre énergétique cellulaire. En modulant le flux de carbone au sein du métabolisme central, la GPI peut affecter l’homéostasie rédox et la disponibilité des précurseurs biosynthétiques dans les cellules prolifératives et adaptées au stress. Au-delà de son rôle enzymatique canonique, la GPI a également été impliquée dans des activités de signalisation extracellulaire susceptibles de moduler la motilité cellulaire et les interactions avec le microenvironnement, selon le contexte. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles de la GPI sont associées à une dysrégulation métabolique et ont été étudiées en lien avec l’anémie et des phénotypes neurodéveloppementaux, ainsi qu’avec des caractéristiques métaboliques observées dans des modèles de cancer.

GPI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPI. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPI. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPI.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.