Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPI (h): sc-402796

Présentation

L’isomérase du glucose-6-phosphate (GPI) est une enzyme multifonctionnelle qui catalyse l’interconversion réversible du glucose-6-phosphate et du fructose-6-phosphate, une étape centrale reliant la glycolyse et la gluconéogenèse. En contrôlant le flux de carbone à travers ces voies, la GPI influence la production cellulaire d’ATP, la disponibilité des précurseurs biosynthétiques et l’équilibre rédox, façonnant ainsi l’adaptation métabolique en situation de stress. Au-delà de son rôle métabolique cytosolique, il a été rapporté que la GPI participe à des contextes de signalisation extracellulaire, établissant un lien entre le métabolisme, la motilité cellulaire et les interactions avec le microenvironnement. Une activité ou une expression altérée de la GPI est associée à une dérégulation métabolique et a été étudiée dans des contextes incluant l’anémie due à une déficience enzymatique héréditaire et le remodelage métabolique observé dans des modèles de maladies prolifératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPI (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPI, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPI à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPI.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPI pour l'étude de la signalisation de GPI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPI essentiels à la fonction de GPI
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPI pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPI plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPI plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPI. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPI plasmide HDR (h) et le GPI (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPI pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPI définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.