Plasmide Double Nickase (h) GPAM: sc-403961-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPAM correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPAM Double Nickase (h) et le plasmide GPAM Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPAM. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GPAM Antibody (D-10): sc-398135
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPAM | sc-403961-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPAM | sc-403961-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPAM (glycérol-3-phosphate acyltransférase, mitochondriale) code une acyltransférase clé qui catalyse la première étape engagée de la synthèse de novo des glycérolipides en convertissant le glycérol-3-phosphate en acide lysophosphatidique. En contrôlant le flux vers l’acide phosphatidique, le triacylglycérol et les pools de phospholipides en aval, GPAM relie le métabolisme lipidique mitochondrial au stockage énergétique cellulaire, à la biogenèse membranaire et à la signalisation lipidique. L’activité de GPAM recoupe l’équilibre entre l’absorption des acides gras et la β-oxydation, la formation des gouttelettes lipidiques et les réponses au stress métabolique. Une expression ou une activité dérégulée de GPAM a été associée à des altérations de la gestion des lipides dans le foie et le tissu adipeux, et est fréquemment étudiée dans le contexte de la résistance à l’insuline, de la stéatose et de phénotypes cardiométaboliques plus larges.
GPAM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPAM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPAM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPAM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPAM.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.