gp91phox Double Nickase Plasmid (m): sc-419890-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das gp91phox Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- gp91phox Double-Nickase-Plasmid (m) und gp91phox Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cybb abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
gp91phox Double Nickase Plasmid (m) | sc-419890-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
gp91phox Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419890-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Cybb** kodiert **gp91phox (NOX2)**, die katalytische membranständige Untereinheit des phagozytären **NADPH-Oxidase**-Komplexes, der Elektronen von NADPH auf molekularen Sauerstoff überträgt und dadurch Superoxid sowie nachgeschaltete reaktive Sauerstoffspezies erzeugt. Dieser oxidative Burst unterstützt die antimikrobielle Abwehr, redoxabhängige Signalübertragung und die Regulation entzündlicher Reaktionen über Signalwege, die die Phagosomenreifung und die Zytokinproduktion beeinflussen. Die Aktivität von gp91phox erfordert den Zusammenbau mit **p22phox** und zytosolischen Faktoren wie **p47phox**, **p67phox** und **Rac-GTPasen** an Zellmembranen. Eine Störung der Cybb-abhängigen ROS-Produktion wird häufig genutzt, um veränderte angeborene Immunfunktionen und Mechanismen oxidativen Stresses zu modellieren, die in Maussystemen für Immundefizienz- und Entzündungsphänotypen relevant sind.
gp91phox Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cybb-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cybb abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cybb-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cybb-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.