Plásmido Doble Nickase (h) GP-39: sc-402147-NIC

CHI3L1 codifica GP-39 (YKL-40), una glicoproteína secretada de tipo quitinasa que carece de actividad enzimática, pero se une a componentes de la matriz extracelular y modula las interacciones célula–matriz. GP-39 es producida por macrófagos, neutrófilos, condrocitos, fibroblastos y células estromales asociadas a tumores, donde influye en la señalización inflamatoria, la remodelación tisular, los programas angiogénicos y los procesos vinculados a la fibrosis. Se estudia con frecuencia en contextos que involucran vías impulsadas por citocinas como IL-6/STAT3, NF-κB y la remodelación relacionada con TGF-β, así como en la reparación de heridas y en microambientes inflamatorios crónicos. La expresión desregulada de CHI3L1 se asocia con la biología de la artritis y de las enfermedades fibróticas, el asma y otros estados inflamatorios de las vías respiratorias, la neuroinflamación y fenotipos de progresión tumoral, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del acoplamiento entre inflamación y remodelación.

GP-39 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHI3L1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHI3L1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHI3L1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHI3L1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.