golgin 160 Double Nickase Plasmid (h): sc-403862-NIC

GOLGA3 kodiert Golgin 160, ein Coiled-Coil-Golgin, das im Golgi-Apparat lokalisiert ist und dazu beiträgt, die Golgi-Architektur zu organisieren sowie das Andocken und den Transport von Vesikeln zwischen endomembranären Kompartimenten zu unterstützen. Als Teil des sekretorischen Weges trägt Golgin 160 zur Sortierung von Frachtproteinen und zur Aufrechterhaltung der Integrität des Golgi-Bandes (Golgi-Ribbons) bei und beeinflusst damit die Proteinverarbeitung und die Weiterleitung zu nachgeschalteten Zielorten. Eine Störung der Golgi-abhängigen Andock- und Transportprogramme ist mit zellulären Stressantworten, veränderter Signalübertragung sowie Änderungen der Zellpolarität und Migration verbunden, wodurch GOLGA3 ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Mechanismen ist, die die Organisation von Organellen mit krankheitsassoziierten Phänotypen verknüpfen. In der biomedizinischen Forschung wird die Funktion von Golgin 160 häufig im Zusammenhang mit Membrandynamik, Regulation des sekretorischen Weges und Störungen der Golgi-abhängigen Proteostase untersucht.

golgin 160 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GOLGA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GOLGA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GOLGA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GOLGA3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.