Plasmide Double Nickase (m) GOLGB1: sc-432441-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GOLGB1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GOLGB1 Double Nickase (m) et le plasmide GOLGB1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Golgb1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GOLGB1 | sc-432441-NIC | 20 µg | $410.00 |
Golgb1 code la protéine d’échafaudage de la famille des golgines GOLGB1 (giantine), un composant majeur à domaines en hélice enroulée (coiled-coil) de la matrice du Golgi, qui contribue au maintien de l’architecture du ruban golgien et à l’organisation de l’ancrage (tethering) des vésicules. GOLGB1 interagit avec des voies de trafic qui soutiennent le transport du RE vers le Golgi, la progression du cargo au sein du Golgi et la maturation dépendante de la glycosylation des protéines sécrétées et membranaires. Par son rôle dans l’homéostasie du Golgi, Golgb1 influence des processus tels que le dépôt de la matrice extracellulaire, l’expression de récepteurs à la surface cellulaire et la sécrétion polarisée, qui sont au cœur du développement et de l’organisation des tissus. La perturbation de protéines structurales du Golgi, dont la giantine, a été associée à des défauts de ciliogenèse et de biologie du tissu conjonctif, faisant de Golgb1 une cible utile pour étudier des mécanismes dépendants des organites pertinents pour des phénotypes développementaux.
GOLGB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Golgb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Golgb1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Golgb1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Golgb1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.