Plasmide CRISPR d'Activation (h) GODZ: sc-403970-ACT

ZDHHC3, également connu sous le nom de GODZ, code une palmitoyl‑acyltransférase de la famille DHHC qui catalyse la S‑palmitoylation de résidus cystéine cytosoliques sur des protéines cibles, régulant ainsi leur association à la membrane, leur trafic, leur stabilité et l’intensité des signaux qu’elles transmettent. Cette modification lipidique influence le transport vésiculaire ainsi que la compartimentation des récepteurs et des canaux, façonnant de ce fait les réseaux de signalisation synaptique et proches de la membrane. Par son rôle dans les modifications post‑traductionnelles et la protéostasie, ZDHHC3 a été associé à une dérégulation de la communication cellulaire et des réponses au stress, fréquemment étudiées en cancérologie et dans la biologie des maladies neurologiques. Ainsi, ZDHHC3 est couramment étudié pour comprendre comment le remodelage des microdomaines membranaires dépendant de la palmitoylation influence l’activation des voies de signalisation et les phénotypes cellulaires.

GODZ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZDHHC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GODZ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZDHHC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZDHHC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GODZ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZDHHC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GODZ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GODZ dans les cellules tumorales présentant une expression de ZDHHC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.