GnT-V Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403921-NIC

MGAT5 codifica a N-acetilglucosaminiltransferase V (GnT‑V), uma enzima residente no complexo de Golgi que catalisa a adição de ramificações β1,6‑GlcNAc em N‑glicanos, aumentando a complexidade dos glicanos e influenciando o dobramento, a estabilidade e o tráfego de proteínas. Por meio do remodelamento da N‑glicosilação, a GnT‑V modula a abundância e o perfil de sinalização de receptores de superfície celular e de moléculas de adesão, afetando vias ligadas à resposta a fatores de crescimento, às interações célula–célula e à migração. Alterações na atividade de MGAT5 têm sido associadas a redes de glicoproteínas desreguladas observadas em múltiplos contextos de doença, incluindo alterações relacionadas ao câncer na sinalização celular e no comportamento metastático. Como regulador nodal do glicoma celular, MGAT5 é frequentemente estudado na regulação dependente de glicosilação da função de receptores e em processos de reconhecimento relacionados ao sistema imune.

GnT-V O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MGAT5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MGAT5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MGAT5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MGAT5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.