Plásmido Doble Nickase (h) GnT-V: sc-403921-NIC

MGAT5 codifica la N-acetilglucosaminiltransferasa V (GnT‑V), una enzima residente del aparato de Golgi que cataliza la adición de ramificaciones β1,6‑GlcNAc en los N‑glicanos, aumentando la complejidad de los glicanos e influyendo en el plegamiento, la estabilidad y el tráfico de las proteínas. Mediante la remodelación de la N‑glicosilación, GnT‑V modula la abundancia y la señalización de receptores de superficie celular y moléculas de adhesión, afectando vías relacionadas con la respuesta a factores de crecimiento, las interacciones célula‑célula y la migración. La actividad alterada de MGAT5 se ha asociado con redes de glicoproteínas desreguladas observadas en múltiples contextos de enfermedad, incluidos cambios asociados al cáncer en la señalización celular y el comportamiento metastásico. Como regulador nodal del glicoma celular, MGAT5 se estudia con frecuencia en la regulación dependiente de la glicosilación de la función de los receptores y en procesos de reconocimiento relacionados con el sistema inmunitario.

GnT-V El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MGAT5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MGAT5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MGAT5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MGAT5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.