GnT-V Plasmide Double Nickase (h): sc-403921-NIC

MGAT5 codifica la N-acetilglucosaminiltransferasi V (GnT-V), un enzima residente del Golgi che catalizza l’aggiunta di ramificazioni β1,6-GlcNAc sugli N-glicani, aumentando la complessità dei glicani e influenzando il ripiegamento, la stabilità e il traffico delle proteine. Attraverso il rimodellamento della N-glicosilazione, GnT-V modula l’abbondanza e l’output di segnalazione dei recettori di superficie e delle molecole di adesione, influenzando vie legate alla risposta ai fattori di crescita, alle interazioni cellula-cellula e alla migrazione. Un’attività alterata di MGAT5 è stata associata a reti di glicoproteine deregolate osservate in diversi contesti patologici, incluse modifiche della segnalazione cellulare e del comportamento metastatico associate al cancro. In quanto regolatore nodale del glicoma cellulare, MGAT5 è frequentemente studiato nella regolazione, dipendente dalla glicosilazione, della funzione recettoriale e dei processi di riconoscimento correlati al sistema immunitario.

GnT-V Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MGAT5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MGAT5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MGAT5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MGAT5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.