Plásmido Doble Nickase (h) Glyoxalase I: sc-401914-NIC

El gen humano **GLO1** codifica la **glioxalasa I**, una metaloenzima citosólica que cataliza la desintoxicación de **metilglioxal** dependiente de glutatión al convertir intermediarios **hemitioacetales** en **S‑D‑lactoilglutatión**. Esta actividad es fundamental para el sistema de la glioxalasa, que limita la acumulación de dicarbonilos reactivos y de los productos finales de glicación avanzada derivados, vinculando a **GLO1** con el equilibrio redox celular, la proteostasis y las respuestas al estrés metabólico. La alteración de la función de la glioxalasa I puede modificar el estrés carbonílico asociado a la glucólisis e influir en vías de señalización y de daño relacionadas con la glicación, el estrés oxidativo y la inflamación. Los cambios en la expresión o actividad de **GLO1** se han estudiado en contextos como las complicaciones relacionadas con la diabetes, la neurodegeneración y el metabolismo tumoral como un indicador de la capacidad de desintoxicación de dicarbonilos.

Glyoxalase I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLO1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.