Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glyoxalase I: sc-401914-ACT

Le gène humain **GLO1** code la glyoxalase I, une métalloenzyme zincodépendante qui catalyse la première étape — et l’étape limitante — du système des glyoxalases, en convertissant le sous-produit cytotoxique de la glycolyse, le méthylglyoxal (sous forme d’hémithioacétal avec le glutathion), en **S‑D‑lactoylglutathion**. En contrôlant les niveaux de méthylglyoxal, **GLO1** contribue à limiter la glycation non enzymatique des protéines et des acides nucléiques et à réduire la formation de produits de glycation avancée (AGE), influençant ainsi l’homéostasie rédox et les réponses cellulaires au stress. L’activité de **GLO1** est liée au remodelage métabolique et à la capacité de détoxification, des processus fréquemment étudiés dans des modèles de stress oxydant, d’inflammation et d’altération du métabolisme du glucose. Une clairance dérégulée du méthylglyoxal et une charge accrue de glycation sont pertinentes pour des phénotypes associés à des maladies, notamment la résistance à l’insuline, la dysfonction vasculaire et la tolérance au stress des cellules tumorales, ce qui soutient l’utilisation de **GLO1** comme nœud fonctionnel en recherche sur le métabolisme et la protéostase.

Glyoxalase I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLO1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glyoxalase I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLO1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLO1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glyoxalase I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLO1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glyoxalase I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glyoxalase I dans les cellules tumorales présentant une expression de GLO1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.