Glycophorin C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405123-ACT

GYPC kodiert Glykophorin C, ein wichtiges Sialoglykoprotein der Membran menschlicher Erythrozyten, das zur Integrität der Erythrozytenmembran und zu deren Oberflächenladung beiträgt. Glykophorin C ist über Wechselwirkungen, die die Verbindung zwischen Transmembranproteinen und dem darunterliegenden Spektrin-Actin-Gerüst unterstützen, Teil des membranständigen Zytoskelettnetzwerks und beeinflusst dadurch die Verformbarkeit und Stabilität von Erythrozyten während der Zirkulation. Genetische Varianten oder eine veränderte Expression von GYPC sind mit Phänotypen der Erythrozytenmembran und der Vielfalt von Blutgruppenantigenen assoziiert und werden im Kontext struktureller Erythrozytenerkrankungen sowie von Wirt–Pathogen-Interaktionen untersucht, die Erythrozyten betreffen. Als membranverankertes Glykoprotein stellt Glykophorin C zudem ein gut untersuchbares Modellsystem dar, um Programme der erythroiden Differenzierung und den Transport von Membranproteinen zu erforschen.

Glycophorin C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GYPC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Glycophorin C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GYPC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GYPC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Glycophorin C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GYPC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Glycophorin C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Glycophorin C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GYPC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.