Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405279-NIC

ヒトGPX5は、セレン依存性の抗酸化酵素であるグルタチオンペルオキシダーゼ5をコードしており、グルタチオンを用いて過酸化水素および脂質ヒドロペルオキシドを還元することで、酸化損傷を抑制します。GPX5の活性はレドックス恒常性を維持し、膜の完全性、タンパク質の酸化、ならびに炎症やアポトーシスに関連する下流シグナル伝達経路に対する酸化ストレス駆動性の影響を制限するのに寄与します。GPX5は雄性生殖器系で最もよく特徴づけられている一方で、その制御機構と抗酸化機能は、活性酸素種（ROS）や酸化傷害に対するより広範な細胞応答とも関連しています。グルタチオンペルオキシダーゼが関与するレドックス制御の破綻は、不妊、代謝ストレス、腫瘍生物学など、ROSがゲノム安定性や細胞運命決定に影響する状況で頻繁に研究されています。

Glutathione Peroxidase 5/GPX5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPX5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPX5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPX5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPX5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。