Plasmide Double Nickase (h) Glutathione Peroxidase 5/GPX5: sc-405279-NIC

Le gène humain **GPX5** code la glutathion peroxydase 5, une enzyme antioxydante dépendante du sélénium qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques en utilisant le glutathion afin de limiter les dommages oxydatifs. L’activité de GPX5 contribue à l’homéostasie rédox et aide à contenir les effets du stress oxydatif sur l’intégrité membranaire, l’oxydation des protéines et les voies de signalisation en aval liées à l’inflammation et à l’apoptose. Bien que GPX5 soit surtout caractérisée dans l’appareil reproducteur masculin, sa régulation et sa fonction antioxydante la rattachent à des réponses cellulaires plus larges aux espèces réactives de l’oxygène et aux lésions oxydatives. Une régulation rédox perturbée impliquant les glutathion peroxydases est fréquemment étudiée dans des contextes tels que l’infertilité, le stress métabolique et la biologie tumorale, où les espèces réactives de l’oxygène influencent la stabilité génomique et les décisions de destinée cellulaire.

Glutathione Peroxidase 5/GPX5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPX5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPX5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPX5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.