Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glut9 (h): sc-406232

Présentation

SLC2A9 code Glut9, un transporteur facilité qui joue un rôle central dans la gestion cellulaire de l’urate et le transport des hexoses, avec une fonction particulièrement importante dans la physiologie rénale et hépatique. Glut9 contribue au passage transmembranaire de l’acide urique et de métabolites apparentés, influençant l’homéostasie systémique de l’urate ainsi que l’équilibre redox. Une activité altérée de SLC2A9 est associée à des variations des taux sériques d’urate et a été impliquée dans des troubles du métabolisme des purines, notamment l’hyperuricémie et la susceptibilité à la goutte, ainsi que dans des phénotypes liés au rein. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de SLC2A9 peut affecter les flux métaboliques, les réponses au stress oxydatif et des réseaux de transporteurs pertinents pour le transport épithélial et les voies de détection des nutriments.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glut9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC2A9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC2A9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC2A9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glut9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC2A9 pour l'étude de la signalisation de Glut9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC2A9 essentiels à la fonction de Glut9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC2A9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glut9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Glut9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC2A9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glut9 plasmide HDR (h) et le Glut9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC2A9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC2A9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.