Glut12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-436139

Übersicht

Slc2a12 kodiert den Glukosetransporter 12 (GLUT12), einen erleichternden Hexosetransporter, der – abhängig von Zelltyp und Stoffwechselzustand – die basale sowie die insulinabhängige Glukoseaufnahme unterstützt. In Mausgeweben trägt GLUT12 zur zellulären Glukosehomöostase bei und ist in Signal- und Stoffwechselwege eingebunden, die die Energienutzung steuern, darunter Glykolyse, Glykogenstoffwechsel und die Insulin/PI3K–AKT-Signalkaskade. Eine veränderte Slc2a12-Expression oder -Trafficking wurde mit metabolischer Anpassung in insulinempfindlichen Geweben in Verbindung gebracht und kann Phänotypen beeinflussen, die mit Adipositas, Insulinresistenz und damit verbundenen kardiometabolischen Stressantworten assoziiert sind. Die Untersuchung der Glut12-Funktion hilft zu klären, wie verschiedene Mitglieder der GLUT-Familie den Glukosefluss auf Gewebe verteilen und wie Redundanz unter Transportern die metabolische Widerstandsfähigkeit prägt.

Das Glut12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc2a12-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc2a12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc2a12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Glut12-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc2a12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Glut12-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc2a12-Exone abzielen, die für die Glut12-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc2a12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Glut12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Glut12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc2a12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Glut12 HDR-Plasmid (m) und Glut12 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc2a12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc2a12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.