Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glucose Transporter Glut3 (m): sc-423000

Présentation

Slc2a3 code le transporteur facilité du glucose à haute affinité GLUT3, une voie majeure de l’absorption basale du glucose dans les cellules de souris à forte demande métabolique, notamment les neurones et les populations immunitaires activées. En régulant la disponibilité intracellulaire du glucose, GLUT3 soutient le flux glycolytique, la production d’ATP et les voies biosynthétiques qui relient la détection des nutriments à la survie et à la prolifération cellulaires. Une activité de GLUT3 altérée peut modifier l’équilibre rédox et des réseaux de signalisation métabolique tels qu’AMPK et mTOR, influençant les réponses au stress et les programmes de différenciation. Le dérèglement du transport du glucose est fréquemment étudié en neurobiologie, en inflammation et dans des phénotypes de maladies d’origine métabolique, où des changements de l’utilisation du glucose contribuent à la physiopathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glucose Transporter Glut3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc2a3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc2a3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc2a3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glucose Transporter Glut3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc2a3 pour l'étude de la signalisation de Glucose Transporter Glut3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc2a3 essentiels à la fonction de Glucose Transporter Glut3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc2a3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glucose Transporter Glut3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Glucose Transporter Glut3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc2a3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glucose Transporter Glut3 plasmide HDR (m) et le Glucose Transporter Glut3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc2a3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc2a3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.