Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glucose Transporter Glut2 (h): sc-400347

Présentation

SLC2A2 code pour le transporteur du glucose de type 2 (GLUT2), un transporteur facilité des hexoses qui assure un flux bidirectionnel de glucose à travers la membrane plasmique de manière dépendante des gradients de concentration. Dans les tissus humains, GLUT2 contribue à la détection des nutriments et à l’homéostasie métabolique en favorisant l’entrée et la libération du glucose et en influençant des voies en aval liées à la glycolyse, à la néoglucogenèse et à la dynamique de sécrétion de l’insuline. Des altérations de l’expression ou de la fonction de SLC2A2 ont été associées à une perturbation de la gestion du glucose et à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie du diabète, de la production hépatique de glucose et de la fonction des îlots pancréatiques. Comme GLUT2 peut également transporter d’autres hexoses, une perturbation de SLC2A2 affecte plus largement l’utilisation des glucides et l’équilibre énergétique cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glucose Transporter Glut2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC2A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC2A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC2A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glucose Transporter Glut2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC2A2 pour l'étude de la signalisation de Glucose Transporter Glut2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC2A2 essentiels à la fonction de Glucose Transporter Glut2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC2A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glucose Transporter Glut2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Glucose Transporter Glut2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC2A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glucose Transporter Glut2 plasmide HDR (h) et le Glucose Transporter Glut2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC2A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC2A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.