Plasmide Double Nickase (h) GLI-2: sc-400839-NIC

Le gène humain **GLI2** code **GLI-2**, un facteur de transcription à doigts de zinc qui agit comme un effecteur principal de la signalisation Hedgehog canonique en aval de **PTCH1** et **SMO**. Lors de l’activation de la voie, GLI-2 régule des programmes transcriptionnels qui contrôlent la mise en place des patrons embryonnaires, les décisions de destinée cellulaire ainsi que, selon le contexte, la prolifération et la différenciation. L’activité de GLI2 est modulée par des processus post-traductionnels et par des interactions avec d’autres voies, telles que **TGF-β**, **WNT/β-caténine** et **MAPK**, intégrant ainsi des signaux du développement au maintien de l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation de la signalisation dépendante de GLI2 a été associée à des états transcriptionnels oncogéniques pilotés par la voie Hedgehog et à des anomalies du développement, ce qui fait de GLI2 une cible fréquente dans les études sur la signalisation des morphogènes et le contrôle transcriptionnel.

GLI-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLI2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLI2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLI2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.