GLI-1/GLI1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400266-ACT

GLI1 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der als zentraler terminaler Effektor der Hedgehog-Signalübertragung fungiert und vorgelagerte Signale von PTCH1 und SMO integriert, um Genprogramme zu regulieren, die Proliferation, Differenzierung und Gewebemusterung steuern. Im Zellkern bindet GLI-1 an GLI-Konsensus-Elemente, um die Expression von Zielgenen zu modulieren, die an der Zellzyklusprogression, stammzellähnlichen Zuständen und der epithelial-mesenchymalen Transition beteiligt sind. Crosstalk mit Signalwegen wie TGF-β, MAPK und PI3K/AKT kann den transkriptionellen Output von GLI1 sowie kontextspezifische Phänotypen feinjustieren. Eine dysregulierte GLI1-Aktivität wird häufig als molekularer Readout für eine aberrante Hedgehog-Signalwegaktivierung bei Krebserkrankungen und anderen Entwicklungsstörungen herangezogen.

GLI-1/GLI1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GLI1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GLI-1/GLI1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GLI1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GLI1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GLI-1/GLI1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GLI1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GLI-1/GLI1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GLI-1/GLI1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GLI1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.