GIT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424063

Descripción general

GIT2 (proteína activadora de la GTPasa ARF que interactúa con quinasas asociadas a receptores acoplados a proteína G, ArfGAP 2) es una proteína de andamiaje con actividad ARF-GAP que coordina el tráfico de membranas y la remodelación del citoesqueleto mediante la integración de señales procedentes de quinasas asociadas a GPCR y de pequeñas GTPasas. En células de ratón, GIT2 actúa dentro de complejos de señalización de paxilina/PIX/PAK para regular el recambio de las adhesiones focales, la extensión celular y la migración dirigida, acoplando estos procesos a la dinámica de la actina y a la endocitosis. También contribuye a la señalización en respuesta al estrés y a la internalización de receptores, conectando redes de adhesión y señalización que moldean las respuestas celulares a señales del entorno. Las vías asociadas a GIT2 desreguladas se han estudiado en contextos de motilidad alterada y señalización inflamatoria, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de remodelación tisular y del comportamiento celular asociado a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GIT2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Git2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Git2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Git2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GIT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Git2 para la investigación de la señalización de GIT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Git2 críticos para la función de GIT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Git2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GIT2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GIT2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Git2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GIT2 (m) y el plásmido HDR GIT2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Git2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Git2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.