Plásmido CRISPR de Activación (h) GIPR: sc-402895-ACT

El GIPR humano codifica el receptor del polipéptido insulinotrópico dependiente de glucosa, un GPCR de clase B expresado en los islotes pancreáticos y otros tejidos metabólicamente activos que se acopla principalmente a Gs para elevar el AMPc y activar la transcripción dependiente de PKA/CREB. La señalización de GIPR modula la secreción de insulina estimulada por glucosa, la supervivencia de las células β y programas anabólicos impulsados por nutrientes, con una comunicación adicional con las vías PI3K/AKT y ERK/MAPK que influyen en el crecimiento celular y las respuestas al estrés. La alteración de la expresión o la señalización de GIPR se ha implicado en la desregulación metabólica, incluidos fenotipos relacionados con la obesidad y la diabetes tipo 2, y también se utiliza como marcador del estado de linaje endocrino. Como resultado, GIPR se estudia ampliamente en la biología de receptores hormonales, la función de los islotes y las redes génicas reguladas por AMPc relevantes para los mecanismos de enfermedad metabólica.

GIPR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GIPR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GIPR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GIPR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GIPR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GIPR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GIPR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GIPR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GIPR en células tumorales con expresión de GIPR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.