GILZ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401424-ACT

TSC22D3 kodiert den glucocorticoid-induced leucine zipper (GILZ), einen stress- und hormonabhängigen Regulator, der die Signalübertragung des Glukokortikoidrezeptors mit der transkriptionellen Kontrolle von Immun- und Entzündungsprogrammen verknüpft. GILZ moduliert unter anderem Signalwege wie NF-κB und AP-1 und beeinflusst damit die Zytokinexpression, die Aktivierung von T‑Zellen und die Polarisierung von Makrophagen; zudem kann es über Interaktionen mit MAPK- und PI3K/AKT-assoziierten Signalknoten das Zellüberleben und die Differenzierung mitsteuern. Eine veränderte Expression von TSC22D3/GILZ wurde mit dysregulierten Entzündungszuständen und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht und wird häufig in Zusammenhängen untersucht, in denen die Glukokortikoidantwort, Toleranz oder Mechanismen der Immunsuppression relevant sind. Diese Eigenschaften machen GILZ zu einem nützlichen molekularen Ansatzpunkt, um transkriptionelle Netzwerke zu analysieren, die Entzündung, Stressanpassung und linienspezifische Immunfunktionen in menschlichen Zellen steuern.

GILZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TSC22D3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GILZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TSC22D3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TSC22D3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GILZ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TSC22D3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GILZ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GILZ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TSC22D3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.