Plasmide Double Nickase (h) Giantin: sc-418145-NIC

GOLGB1 code pour la giantine (Giantin), une grande golgine à domaines coiled-coil qui s’ancre aux membranes de l’appareil de Golgi et contribue à l’organisation de son architecture en capturant des vésicules de transport et en coordonnant les événements d’amarrage (tethering). La giantine soutient le trafic du réticulum endoplasmique (RE) vers le Golgi ainsi que le trafic intra-Golgi, participe à la glycosylation et à l’homéostasie de la voie de sécrétion, et influence l’organisation spatiale des enzymes golgiennes nécessaires à la maturation des protéines. L’altération de la fonction des golgines, y compris le maintien du Golgi dépendant de la giantine, est associée à des modifications de la sécrétion de la matrice extracellulaire, à des réponses au stress dans la voie sécrétoire et à des phénotypes liés à la ciliogenèse et à la morphogenèse tissulaire. En tant que régulateur structural et du trafic, la giantine est largement utilisée en biologie cellulaire pour étudier l’intégrité du Golgi, la dynamique des vésicules et la maturation des protéines dans les cellules humaines.

Giantin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GOLGB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GOLGB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GOLGB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GOLGB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.