Ggta1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420545

Übersicht

Ggta1 kodiert die Alpha-1,3-Galactosyltransferase 1, eine im Golgi lokalisierte Glykosyltransferase, die die Übertragung von Galactose katalysiert und so das Galα1-3Gal-Epitop auf Glykoproteinen und Glykolipiden erzeugt. Durch die Ausprägung terminaler Glykanstrukturen beeinflusst Ggta1 die Proteinreifung, die Membranglykosylierung sowie Zell‑Zell- bzw. Zell‑Matrix-Interaktionen, die die Immunerkennung und inflammatorische Signalwege beeinflussen können. Bei Mäusen ist die Ggta1-Aktivität für Studien zur Biologie von Xenoantigenen und zu komplement- bzw. antikörpervermittelten Reaktionen relevant und dient als Modell für glykosylierungsabhängige Mechanismen in der Immunität. Eine Störung dieses Enzyms ist daher nützlich, um zu untersuchen, wie Glykanepitope die Rezeptorbindung, die Gewebeverträglichkeit und nachgeschaltete Immunwege regulieren.

Das Ggta1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ggta1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ggta1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ggta1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ggta1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ggta1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ggta1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ggta1-Exone abzielen, die für die Ggta1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ggta1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ggta1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ggta1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ggta1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ggta1 HDR-Plasmid (m) und Ggta1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ggta1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ggta1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.