Plásmido CRISPR de Activación (h) GGPS1: sc-404003-ACT

El GGPS1 humano codifica la geranilgeranil difosfato sintasa 1, una enzima clave de la vía del mevalonato que produce pirofosfato de geranilgeranilo (GGPP) para la prenilación de proteínas y la biosíntesis posterior de isoprenoides. Al suministrar GGPP, GGPS1 favorece la localización en membrana y la señalización de pequeñas GTPasas y otras proteínas preniladas, influyendo en el tráfico vesicular, la dinámica del citoesqueleto, la función mitocondrial y una homeostasis metabólica más amplia. La alteración de la prenilación vinculada a GGPS1 se ha asociado con una señalización desregulada del crecimiento y de la respuesta al estrés, y se estudia con frecuencia en contextos en los que el flujo del mevalonato y las vías dependientes de la prenilación contribuyen a fenotipos relevantes para enfermedades. Como resultado, GGPS1 sirve como un nodo útil para investigar el crosstalk entre metabolismo lipídico y señalización, la proteostasis y vulnerabilidades de la vía en modelos celulares.

GGPS1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GGPS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GGPS1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GGPS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GGPS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GGPS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GGPS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GGPS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GGPS1 en células tumorales con expresión de GGPS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.