GFRαL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436523
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GFRαL El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GFRαL, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GFRαL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-436523 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen **Gfral** del ratón codifica **GFRαL (GFRAL)**, un correceptor anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se une de forma selectiva a **GDF15** y transmite la señal a través de la tirosina quinasa receptora **RET**. Esta vía activa las señales descendentes **MAPK/ERK** y **PI3K/AKT** para regular los circuitos neuronales que controlan el equilibrio energético, la conducta alimentaria y la homeostasis metabólica sistémica. La expresión de **GFRAL** está enriquecida en regiones del rombencéfalo implicadas en el control del apetito, lo que vincula la señalización **GDF15–GFRAL–RET** con la regulación del peso corporal y con respuestas tipo anorexia asociadas al estrés en modelos preclínicos. En consecuencia, **Gfral** se estudia ampliamente en la señalización neurometabólica, la biología relacionada con la caquexia y los mecanismos que conectan señales inflamatorias con la regulación central del metabolismo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GFRαL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gfral en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gfral junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gfral tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GFRαL.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gfral para la investigación de la señalización de GFRαL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Gfral críticos para la función de GFRαL
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gfral para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GFRαL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GFRαL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gfral. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GFRαL (m) y el plásmido HDR GFRαL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gfral para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gfral definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.