Plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRα-3 (h): sc-405061

Présentation

GFRA3 code le récepteur humain alpha-3 de la famille du facteur neurotrophique dérivé des lignées de cellules gliales (GDNF), GFRα-3, un corécepteur ancré au GPI qui confère une spécificité de ligand au facteur neurotrophique artémine ainsi qu’à des ligands apparentés de la famille GDNF. Après liaison du ligand, GFRα-3 coopère avec la tyrosine kinase réceptrice RET pour initier des cascades de signalisation, notamment MAPK/ERK et PI3K/AKT, qui régulent la survie neuronale, la différenciation et le guidage axonal. GFRA3 est largement étudié dans le développement du système nerveux périphérique et les interactions neuro-immunes, où une signalisation récepteur-ligand altérée a été associée à des mécanismes pertinents pour la fonction des neurones sensoriels et le traitement de la douleur inflammatoire. Une signalisation RET/famille GDNF dérégulée impliquant GFRA3 est également étudiée dans des contextes de signalisation des cellules tumorales, d’invasion et de dialogue avec le microenvironnement dans certains modèles de cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRα-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GFRA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GFRA3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GFRA3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GFRα-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GFRA3 pour l'étude de la signalisation de GFRα-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GFRA3 essentiels à la fonction de GFRα-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GFRA3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GFRα-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GFRα-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GFRA3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GFRα-3 plasmide HDR (h) et le GFRα-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GFRA3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GFRA3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.