Plásmido CRISPR de Activación (h) GFRα-3: sc-405061-ACT

GFRA3 codifica el receptor humano GFRα-3 anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI), un correceptor que se une a miembros de la familia de ligandos del factor neurotrófico derivado de la línea celular glial (GDNF) y acopla la señalización a la tirosina cinasa del receptor RET. Mediante la activación dependiente de RET de MAPK/ERK, PI3K/AKT y vías relacionadas de supervivencia y diferenciación, GFRα-3 contribuye al desarrollo neuronal, la guía axonal y el mantenimiento de neuronas sensoriales periféricas y autonómicas. La expresión y señalización de GFRA3 se han investigado en contextos de regulación del neurodesarrollo, biología de neuronas sensoriales relacionadas con el dolor y modulación de vías oncogénicas en modelos tumorales seleccionados en los que está implicada la actividad del eje RET. Como componente receptor de superficie celular, también es útil para estudiar la especificidad ligando–receptor, el ensamblaje del complejo receptor y las respuestas transcripcionales aguas abajo.

GFRα-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GFRA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GFRα-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GFRA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GFRA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GFRα-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GFRA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GFRα-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GFRα-3 en células tumorales con expresión de GFRA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.