Plasmide CRISPR d'Activation (h) GFRα-2: sc-404010-ACT

GFRA2 code le récepteur humain de la famille du GDNF alpha-2 (GFRα‑2), un co‑récepteur ancré à la membrane via un GPI qui se lie à la neurturine et à des ligands apparentés afin de faciliter la signalisation du récepteur tyrosine kinase RET. Ce complexe récepteur régule le soutien neurotrophique, la différenciation neuronale, le guidage axonal et la survie via des voies telles que MAPK/ERK et PI3K/AKT, et peut influencer la migration cellulaire ainsi que la croissance des neurites dans des tissus en développement comme dans des tissus matures. Les altérations de l’expression de GFRA2 ont été étudiées dans le contexte de la neurobiologie du développement et des maladies neurodégénératives, et une signalisation dérégulée de l’axe RET est pertinente pour plusieurs domaines de recherche sur les cancers et le système nerveux périphérique. En tant que déterminant de surface cellulaire de la réactivité aux ligands, GFRα‑2 est fréquemment utilisé pour étudier la dynamique de signalisation des facteurs trophiques, l’assemblage du complexe récepteur et les programmes transcriptionnels en aval.

GFRα-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GFRA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GFRα-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GFRA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GFRA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GFRα-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GFRA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GFRα-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GFRα-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GFRA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.