GFRα-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420539

Descripción general

Gfra1 codifica GFRα-1, un correceptor anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se une al factor neurotrófico derivado de la línea celular glial (GDNF) y lo presenta a la tirosina quinasa RET para iniciar la señalización posterior. Este complejo ligando–receptor regula la supervivencia neuronal, el crecimiento de neuritas y la diferenciación a través de vías que incluyen PI3K–AKT, MAPK/ERK y la señalización dependiente de PLCγ, además de funciones adicionales en tejidos derivados de la cresta neural. En el ratón, la actividad de GFRα-1 también se ha implicado en la morfogénesis renal y en el mantenimiento de las células madre espermatogoniales, lo que refleja su función más amplia en programas de desarrollo y homeostasis tisular. La desregulación de la señalización GDNF–GFRα-1–RET se utiliza ampliamente como marco mecanístico para estudiar defectos del neurodesarrollo, neurodegeneración y fenotipos celulares impulsados por RET en modelos experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GFRα-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gfra1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gfra1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gfra1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GFRα-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gfra1 para la investigación de la señalización de GFRα-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Gfra1 críticos para la función de GFRα-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gfra1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GFRα-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GFRα-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gfra1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GFRα-1 (m) y el plásmido HDR GFRα-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gfra1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gfra1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.