Plasmide Double Nickase (h) GFAP: sc-400130-NIC

La protéine acide fibrillaire gliale (GFAP) est une protéine de filament intermédiaire qui constitue un composant structural majeur du cytosquelette des astrocytes et est largement utilisée comme marqueur de la différenciation astrocytaire et de la gliose réactive. En organisant des réseaux de filaments et en interagissant avec des régulateurs du cytosquelette, la GFAP contribue à la morphologie des astrocytes, à leur stabilité mécanique et à la réponse cellulaire aux lésions ainsi qu'aux signaux inflammatoires. La dynamique de la GFAP recoupe des processus tels que le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et la signalisation du stress, qui façonnent la formation de la cicatrice gliale et les interactions neuro-immunes. Une expression altérée de la GFAP ou sa tendance à s'agréger est associée à un dysfonctionnement des astrocytes dans des contextes neurologiques et neurodégénératifs, notamment la maladie d'Alexander et, plus largement, les réponses du SNC aux lésions.

GFAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GFAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GFAP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GFAP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GFAP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.