Plasmide CRISPR d'Activation (h) GD3 Synthase: sc-404015-ACT

ST8SIA1 code la synthase de GD3, une sialyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la conversion de GM3 en ganglioside disialylé GD3, façonnant ainsi la composition des glycosphingolipides à la membrane plasmique. En modulant des microdomaines membranaires dépendants des gangliosides, la synthase de GD3 influence la signalisation des récepteurs, les interactions cellule–cellule et les processus de trafic vésiculaire, qui s’articulent avec des voies contrôlant la prolifération, la migration et les réponses au stress. Une activité altérée de ST8SIA1 a été associée à des modifications des profils de glycosylation observées en biologie du cancer et en neurobiologie, où l’équilibre des gangliosides peut affecter les programmes de différenciation et la reconnaissance immunitaire. Ces propriétés font de ST8SIA1 un nœud utile pour disséquer la régulation, pilotée par la sialylation, des réseaux de signalisation et de l’organisation membranaire.

GD3 Synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ST8SIA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GD3 Synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ST8SIA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ST8SIA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GD3 Synthase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ST8SIA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GD3 Synthase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GD3 Synthase dans les cellules tumorales présentant une expression de ST8SIA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.